Farmacêutico News - MET – um novo biomarcador no cancro do pulmão de não pequenas células

No decorrer da 14.ª Conferência Nacional de Enfermagem Oncológica, organizada pela Associação de Enfermagem Oncológica Portuguesa (AEOP), teve lugar no dia 25 de setembro um simpósio patrocinado pela Merck sobre as potencialidades do novo biomarcador MET (mesenchymal-to-epithelial transition) no cancro do pulmão de não pequenas células (CPNPC). A sessão teve moderação por parte da Enf.ª Anabela Amarelo (Centro Hospitalar de Vila Nova de Gaia-Espinho) e como palestrante o Dr. Luís Cirnes (Ipatimup Diagnósticos e Coordenador da Unidade de Difusão Científica do IPATIMUP). O Dr. Luís Cirnes começou por apresentar dados do Globocan de 2020, segundo os quais o cancro do pulmão é o quarto cancro com maior incidência em Portugal, afirmando depois que esta é uma patologia “que há 10-15 anos atrás a esperança média de vida em casos avançados seria de apenas 5-8 meses”, sendo que hoje em dia este tempo se alargou para 5-10 anos. O orador considerou que desde 2005 houve um “mudar de página”, e “entrámos na era das terapias direcionadas”, o que é “fundamental, acima de tudo, para a qualidade de vida”. Olhando para os marcadores acionáveis de CPNPC metastático, o especialista destacou as amplificações e defeitos de splice do MET como sendo “mais um biomarcador que nos pode ajudar a combater esta patologia”. Passou de seguida a apresentar as características moleculares do MET, um recetor de tirosina cinase que quando ativado vai promover várias cascatas de sinalização celular. Destacou ainda que o skipping do exão 14 bem como as mutações no mesmo exão (região transmembranar) irão “desregular o normal funcionamento da proteína, e isso vai levar a carcinogénese”, pelo que “a investigação conseguiu criar moléculas capazes de, somente neste tipo de células, impedir que este desregulamento continuasse”. O especialista destacou ainda, para além do skipping do exão 14, outras alterações genéticas que levam à desregulação da proteína MET: mutações no domínio cinase, amplificação/sobreexpressão e fusões. As mutações que podem levar ao skipping do exão 14 podem ocorrer em qualquer local do gene entre os exões 13 e 15, sendo que a região difere de doente para doente. Assim, no seu laboratório, a abordagem é a de ler toda esta sequência, tanto no DNA como no RNA. Segundo as guidelines do NCCN (National Comprehensive Cancer Network), algumas das terapêuticas recomendadas para mutações que levam ao skipping do exão 14 do MET são crizotinib, capmatinib e tepotinib (não aprovados ainda pela Agência Europeia do Medicamento). No que respeita aos métodos de deteção destas alterações, “há o FISH, PCR, a imuno e o NGS”, disse o especialista, explicando depois que se iria centrar no NGS, que é a metodologia utilizada no seu laboratório e a, atualmente, recomendada pelas guidelines internacionais, uma vez que “devemos informar o clínico do maior número de genes possível no menor tempo possível, para que o clínico possa decidir qual a terapia melhor para aquele doente”. O NGS (Next Generation Sequencing) “permite-nos, de uma vez só, sequenciar 52 genes, dado que é o painel por nós adotado”, afirmou, salientando depois que as desvantagens do NGS têm a ver com o custo associado, que no nosso caso esse custo é relativamente acessível. Falando depois nos fármacos, começou por apresentar um estudo de capmatinib (Wolf et al., N Engl J Med 2020), que mostrou a sua eficácia em CPNPC com mutações/ skipping no exão 14 de MET ou amplificações de MET. Mostrou também uma tabela de efeitos secundários de capmatinib, como sendo algo a que os enfermeiros devem prestar particular atenção. Quanto ao tepotinib, outro inibidor de MET para as mutações/ skipping do exão 14, foi também demonstrada a sua eficácia (Paik et al., N Engl J Med 2020), com boas respostas prolongadas no tempo, sendo que neste estudo os materiais biológicos utilizados foram o tecido neoplásico e/ ou a biópsia líquida. Também para o tepotinib, os efeitos secundários são bem caracterizados. Em relação ao trabalho efetuado no IPATIMUP, salientou que recebem essencialmente blocos de biópsia tecidular, podendo também receber lâminas coradas, de onde é possível extrair o DNA e o RNA para a realização do diagnóstico por NGS. Quanto aos cuidados a ter na preparação desse material, ressalvou a necessidade de, após a colheita, não deixar o mesmo sem qualquer tipo de fixador, sendo fundamental ter formol 10% tamponado disponível para fixação imediata, num volume suficiente para cobrir completamente a peça. Destacou ainda cuidados a ter com os tempos de fixação, temperatura da parafina e o número de lâminas. Além da biópsia tecidular, o Dr. Luís Cirnes destacou também o material proveniente de biópsias líquidas (plasma), sendo estas “uma forma direta de, através de uma colheita de sangue normalíssima, extrair o cell-free DNA”. Quanto aos cuidados a ter na biópsia líquida, ressalvou que após a colocação da amostra no tubo PPT, esta deve ser centrifugada. Este tubo contém um gel que atua como barreira física impedindo que as células brancas (leucócitos) lisadas contaminem o ADN tumoral. O orador referiu ainda outras alternativas, nomeadamente os tubos Streck, que permitem a estabilidade da colheita até 72 horas. Depois da extração do ADN tumoral, seja de tecido tumoral ou de plasma obtido através de biópsia líquida, é possível a realização da análise mutacional por NGS. Dados do IPATIMUP de amostras recolhidas em 5531 doentes, no período entre janeiro 2018 a junho 2021, foram identificados 375 doentes (6,7%) com alterações no gene MET. Por fim, o palestrante apresentou dois casos clínicos avaliados no IPATIMUP onde foi possível comprovar a mais valia da análise mutacional por NGS, permitindo assim personalizar a terapêutica nos doentes com CPNPC. Como conclusões, o especialista destacou a necessidade de: Abordagem alargada – através de NGS, e incluindo o máximo de biomarcadores possível; Criar um workflow, um diálogo entre Clínico/Patologia/Administrativos/Patologia Molecular; Método: DNA & RNA = total identificação, principalmente na deteção de alterações do MET; Material: devemos privilegiar a biópsia tecidular, mas a biópsia líquida “é um bom plano B”, quando não é possível obter a mesma ou quando pretendemos monitorizar o estado mutacional ao longo do tempo; Validação da Metodologia (sensibilidade e especificidade) – conhecer as limitações dos métodos; Extremamente importante o controlo de qualidade externo; Molecular Tumor Board (ex: reuniões quinzenais para discussão de casos clínicos exigentes).